超薄切片玻璃刀制作技术及使用方法的探讨

　　自1950年Latta和Hartmann〔”将玻璃刀引人电镜制片技术以来，至今已有40年的历史了。如今，玻璃刀已成为超薄切片的常规工 具。目前最常用的是45度刀尖角的玻璃刀。正常断裂形成的刀其应力线位于左侧，本文所谈的刀均为这种刀(图1)。通常认为玻璃刀的最佳刀口位置位于左 侧’1-7，其理由是在立体镜下可以观察到这一部位平直光洁，而右侧刀口有点状反光的“锯齿”，不能用来切片。但是在近十年的切片实践中我们发现右侧刀口 并非切片“禁区”，常常切出高质量的超薄切片。特别在进行某些切片难度较大的样品(如带有细胞壁及外壳的植物、细茵、藻类、抱子等)时，这一区域里显示出 其锋利耐用的优越性。针对这一现象，我们利用光镜和电镜对刀口的不同部位及其切片进行了观察研究，试从理论上得到比较满意的解释。

　　一、材料和方法

　　(一)玻璃刀的制备

　　分别用瑞曲产LKB--7800，奥地利产Reichert--Jung和国产CQB三种型号制刀机制作45度刀，刀根均小干lmm，材料均为进口的制刀专用玻璃条。

　　(二)玻璃刀口的观察

　　1.用0lympusBH--2型光镜进行背射光观察并拍照。

　　2.将制好的玻璃刀进行喷金导电处理，然后用KYKY--1000B型扫描电镜观察并拍照。

　　(三)切片检验:

　　用刀口的不同部位分别进行同一样品的半薄切片和超薄切片，在光镜和电镜下比较不同部位刀口所切切片的质量。

　　二、结果

　　(一)所谓“锯齿”的真面目

　　利用光镜的透射光源，可以观察到立体镜下刀口的“锯齿”部位实际上是一排靠近刀口的斜纹(图3)，用扫描电镜观察得更清楚(图6)，这些斜纹是刀斜面(T)上的凸起，而不是刀刃上的缺口，所以立体镜下的“锯齿”部位只是一种假像。

　　(二)带有所谓“锯齿”的刀口(右侧刀口)并非切片禁区而且比左侧刀口锋利、耐用。

　　通过对半薄切片和超薄切片的观察证实:右侧刀口优于左侧。左侧刀口虽然一开始可切出两、三张好切片，但之后刀就很易纯化产生刀痕，而右侧刀口可连续切出10--30张高质量的切片(图2)。

　　三、讨论

　　通过对刀口的观察和切片效果的验证，证实了45度玻璃刀的右侧刀口是最佳切割刀口，其原因是:1.所谓的“锯齿”结构并不是出现在刀刃上。扫描电镜下这些“锯齿”结构为刀斜面近刀刃处的一些规则的、走向相同的凸起(S)，而刀刃(CE)仍很平直，无锯齿结构(图6)。

　　立体镜下观察到的所谓“锯齿”结构实际上是由斜面上的斜纹凸起折光产生的(如图4所示)。2.刀右侧斜面(T)结构光滑，刀口平直，这是刀口锋 利的结构基础。将图5与图6相比可以看出刀的右侧斜面(T)比较光滑，而左侧斜面(T)有许多不规则的凹陷和凸起，因而使切片过程中对切片的阻力增大。右 侧斜面上的规则光滑的斜纹凸起(s)在切片过程中起了支托切片的作用，大大减少了切片移动阻力，这是刀刃耐用的结构基础。此外左侧刀刃常出现小缺口 (F)，这无疑是产生刀痕的原因(图5)。而右侧刀刃平直光滑，无缺口(图6)。