铕原子标记技术检验实验室移液器容量误差方法

　　0　引言

　　移液器、进样器是利用空气排代原理的量出式加样器，是临床实验室定性与定量分析的常用工具，广泛应用于免疫学、分子生物学、色谱分析等技术领域，其容量的准确性直接关系到结果的可靠性、可比性与可重复性 [1]。据报道新购置的移液器失准率为 1.56%，则使用 1 万次以下的失准率为 4%，(1~5)万次失准率为 8.82%，(5~10)万次失准率为 21.7%，10 万次以上失准率为 47.6%[2]。故对移液器进行误差检验，既是各实验室内部质量控制的必要条件，又是实现实验室之间检验、检查结果“一单通”的技术前提。

　　目前，移液器的容量检定有重量分析法和分光光度法两种[3、4]，我们在实际工作中成功探索出用铕原子标记技术对移液器的容量进行误差识别，并获国家发明专利。该方法将铕标记技术的高灵敏性与高稳定性结合起来，不受气温、气压的影响，检测灵敏度达 10-12~10-14 g/L[5]，精密度试验显示优异的性能，尤其适用于小容量移液器的容量比对。

　　1　原理与方法

　　1.1　实验原理

　　时间分辨荧光检测技术(time-resolved fluor-oimmunoassay, TR-FIA)以镧系铕原子 (Eu) 作为示踪材料(原子序数 63，原子半径 2.56，原子体积28.9 cm3/mol)，用 β- 萘甲酰三氟丙酮(β-NTA)为荧光增强液，336~337 nm 为激发波长，610~613 nm 为测定波长，利用这类荧光物质荧光寿命长及Stokes 位移大的特点，荧光衰退时间 730 μs，测定延时时间 400 μs，通过波长和时间差两种分辨技术，有效排除非特异本底荧光的干扰，灵敏度高，标记物制备简单，稳定性好。鲁赫曼发射光谱由时间分辨荧光仪测定，测定载体为聚乙烯微孔板。以《移液器检定规程》(JJG 646-2006)为判断标准，建立起精确有效、简便快速的铕原子标记技术对移液器容量精确度进行比对与校准的方法。

　　1.2　仪器与材料

　　上海某生物技术有限公司的 ANYTEST 时间分辨荧光分析仪，配 220 V 电压、50 Hz 频率的稳压电源;上海某仪器厂的 TG-328A 型光电分析天平;待检移液器若干。

　　1.3　实验准备

　　1)聚乙烯微孔板本底检测：空白聚乙烯微孔板在时间分辨荧光分析仪上进行本底测定。

　　2)铕原子标记液制备：上海某生物技术有限公司生产的铕标记试剂盒，取 30 μL 铕加 3 mL 稀释液混合成铕标记液。

　　1.4　移液器加样操作[6] ：

　　1)温度平衡：先使移液器、吸液嘴与铕标记液温度平衡 30 min 后进行操作。

　　2)容量设定：转动移液器顶部调节旋钮，逆时针方向转动，增大加样量;顺时针方向转动，减少加样量，最终将移液器的容量调节到所需刻度。