原子吸收光谱法间接测定樟树叶片中叶绿素总量

　　叶绿素普遍存在于绿色植物和某些微生物中,是其进行光合作用所必须的催化剂,将光能转化为化学能。依照结构叶绿素被分为叶绿素a(C55H72O5N4Mg)叶绿素b(C55H70O6N4Mg),基本结构是卟啉与金属镁的配合物(如图1),其组成比约为3:1[1]。关于叶绿素的理化性质及其在植物体内的作用已有论著[2];从20世纪60年代人们开始从植物中提取叶绿素,叶绿素在化工、医药、食品、保健等方面有了广泛的应用[3]。

　　目前,美国主要用牧草作原料生产叶绿素,中国、日本则从蚕沙中提取:近年来,我国有人从松针和茶叶中提取叶绿素。寻找叶绿素来源丰富,价格低廉的原材料一直是人们关注的问题之一。樟树是常青树,樟树叶易得,但未见从樟树叶中提取叶绿素及对其进行分析测定的研究报道。因此,本文以樟树为样本,采用原子吸收分光光度法对樟树叶片中的叶绿索进行了分析测定叶绿素的提取方法有研磨法、反复冻融浸提法、微波辐射提取法、超声波提取法等[4-7]。对比各方法的优劣,本实验采用研磨法来提取叶绿素。

　　叶绿素含量的测定方法主要有分光光度法、活体叶绿素仪法、极谱法、光声光谱法、原子吸收光谱法等。用原子吸收间接测定叶绿素总量的方法,操作简单,干扰少。

　　1　实验部分

　　1. 1　仪器及试剂

　　WFX-110型原子吸收分光光度计(北京瑞利分析仪器公司):自动双重纯水蒸馏器(上海亚太技术玻璃公司):AG245型电子天平(瑞士梅特立)。1. 000mg/mL镁储备液:用电子天平准确称取固体MgO粉末0. 4146g于100mL小烧杯中,滴加1mol/L的盐酸使之溶解,把溶液定量转移到250mL的容量瓶中,用去离子水稀释到刻度,摇匀。此溶液为1. 000mg/mL的镁储备液。其它浓度的镁标准溶液由此稀释得到。

　　其他所用试剂均为分析纯: 200目的石英砂:水为二次蒸馏水。

　　1. 2　叶绿素的提取和试样溶液的制备

　　摘取某校园内日照良好、无虫、无病害的新鲜樟树叶片,洗净叶片表面灰尘自然阴干后,剪去粗叶脉,用电子天平准确称取去叶脉叶片约2g,剪成碎片后放入研钵中,加入少量碳酸钙、石英砂和5.0mL无水乙醇,研磨至叶组织变白;过滤,用无水乙醇洗涤残渣至无色,收集滤液于50ml。容量瓶中,用无水乙醇定容,得叶绿素乙醇提取液,置于暗处备用。

　　移取上述乙醇提取液4. 0mL于分液漏斗中,加入4. 0mL石油醚,轻轻摇动:加4. 0mL饱和NaCI溶液,振荡;再加12. 0mL蒸馏水,充分振荡后放置分层,上层为深绿色石油醚层,下层为水-乙醇层。分出水-乙醇层,再分别用40mL石油醚,重复萃取两次,合并石油醚相-用洗瓶沿漏斗壁以水洗涤石油醚相3~4次,以洗去乙醇及无机态盐类。于石油醚相中加入20mL 0. 8mol/LHCI溶液,振荡,静置5min分层,分取水相,并转移至50mL容量瓶中,用蒸馏水定容,得到待测试液。