3100型遗传分析仪的应用和维护

　　20世纪末，分子生物学技术的发展极大的促进了生物科学各个领域的研究。与形态学、细胞学和同工酶提供的信息相比，DNA能够提供更直接，更准确和更多的遗传变异信息。但由于在公司进行样品测序及片断分析存在着耗时耗力以及准确性较差等缺点，因此很多高等院校及科研院所为了满足自身教学科研发展的需要，都购置了遗传分析仪。我院于1 9 9 9 年引进了A B IPRISMTM310型遗传分析仪，其采用毛细管技术取代传统的聚丙烯酰胺平板进行DNA序列分析，繁琐的灌胶和上样过程全部由泵和自动进样器完成，实现了自动灌胶、自动进样、自动数据收集。但由于其一次只能进行单一样品测定，因此远远不能满足我院的使用，我们又于2004年购置了ABI Prism 3100型遗传分析系统，它是一个全自动化多泳道的操作平台，可同时分析16个样品，足以满足中高等样品量实验室的需要，与310型遗传分析仪相比其自动化程度更高，应用更广泛。

　　一、3100 型遗传分析仪的应用

　　1.工作原理

　　在合成的寡核苷酸引物同单链 DNA 模板退火的反应中,除了含有DNA聚合酶和四种正常的dNTP外还有用非放射性荧光素标记的ddNTP，ddNTP的3-H′ 取代了普通脱氧核糖 3-OH′,在DNA链的延伸时dNTP与ddNTP展开竞争，如果是dNTP，延伸反应继续进行，如果是ddNTP，由于缺少3-OH′将会阻断后续dNTP形成磷脂二脂键，延伸进一步被终止，反应产生大量的寡核苷酸链，这些产物可用凝胶电泳分离，染料分子用激光激活，并且荧光信号被放大再被光电倍增管捕获，根据每种不同染料的颜色来判断不同的核苷酸，根据荧光峰的形状和连续峰之间的距离识别每一个碱基。

　　2.主要特点

　　3100型遗传分析仪操作简单，仅需安装毛细管、注射器，将装有预处理样品的样品板放置于自动进样器上后便可运行。在自动进样器上一次可放置2个96孔或384孔板。一旦样品板放好后，样品被自动吸入毛细管，在电场作用下泳动，并根据用户设定的参数进行分析，可连续分析多达768个样品。每一轮16个样品的测定工作均为自动完成，直至测完样品盘中的所有样品。

　　3100型遗体分析仪采用光栅CCD荧光检测技术(四色荧光标记技术)，实现多色荧光同时检测，，从激光光源发出的光线被光学元件分成两股，16根毛细管被一束激光同时从两面照射，有效提高荧光检测灵敏度和均一性。3100型专用的序列分析软件(Seq Analysia)和片断分析软件(GeneMapper)可以对结果进行自动分析。

　　3.3100型遗传分析仪的应用

　　3100型遗传分析仪能够完成对新基因序列的测定或比较测序工作。此外，还可进行多种片段分析，包括微卫星DNA分析(SSR)、限制性片段长度多态性分析(AFLP)、比较基因型分析、单核苷酸多态性(SNP)、单链构象多态性分析(SSCP)等。3100遗传分析仪有两种专利液体分离胶，分别为POP4和POP6，并且有多种长度选择的自动涂层毛细管(22cm，36cm，50cm，80cm)，可以满足不同的应用需求(见表1)