影响高效液相色谱仪保留时间的因素及解决对策

　　当今农产品食品安全已成为世人十分关注的热门话题，食品安全监测面临着严峻挑战。高效液相色谱技术在食品安全性检测和分析方面的应用范围较广， 具有分离效率高、速度快，以及流动相可选择范围宽、灵敏度高、流出组分容易收集等优点，既可用于分离也可用于定量，更适用于各种各样化合物的分离检测。

　　影响液相色谱的因素很多， 但作为色谱定性分析依据的保留时间对试验结果的影响尤为重要。 笔者总结长期实践工作的经验，分析了高效液相色谱仪保留时间的变异性，并提出了相应的解决对策。

　　1 保留时间来回波动

　　保留时间来回波动是指保留时间无固定规律的波动，而环境温度的变化常常是造成保留时间波动的主要原因。因此在检测时，保持实验室温度的恒定，可有效控制保留时间的来回波动。

　　2 保留时间漂移

　　保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志， 同一种物质 2 次的保留时间相差不要超过 15 s， 超过了 30 s 可看做保留时间漂移，无法进行定性。

　　2.1 环境温度不稳定 保留时间的再现性需要稳定的温度， 通常实验室温度的改变以及环境大气压的变化会导致保留时间的漂移，因此，每天的实验室温差应控制在 3 ℃以内，避免阳光直射，同时仪器周围要保证足够的空间。

　　2.2 流动相组成的缓慢变化 流动相组成的缓慢变化是保留时间漂移的常见原因，例如，pH 值过高或过低、流动相没有混匀、流动相中有挥发成分。

　　2.3 色谱柱的污染 色谱柱的污染是保留时间漂移的另一个常见原因，HPLC 色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质，当柱头污染时，污染物将延长样品的保留时间。 水是较容易污染的流动相组分，所有配制流动相的水应新鲜以不超过 2 d 为宜，并通过 0.45 μm 的水相滤膜过滤，以消除由于污染对分析结果的影响。 如果应用条件许可， 可在溶解中加入 0.000 1~0.001mol/L 的叠氮化钠，同时应使用灭过菌的溶剂瓶来减缓藻类生长。 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲溶液。 此外，要定期清洗色谱柱或更换新的色谱柱。

　　2.4 系统平衡 系统平衡也是影响保留时间漂移的一个重要原因，若压力稳定而保留时间呈有规律变化，多数是色谱柱未平衡好，特别是含有的流动相，需较长时间去平衡。 系统平衡通常需要 10~20 个柱体积的流动相， 而离子对试剂则需要 50 倍柱体积的冲洗才能平衡，一般需要用流动相平衡柱子 30 min， 然后用标准品重复进样看保留时间是否基本平衡，当保留时间基本平衡后再进样品。