KDN-04B型定氮仪测定乳粉中蛋白质含量的研究

　　衡量食品的营养成分时，要测定蛋白质含量。蛋白质含量测定方法，目前常用的有凯氏定氮法、双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法等。测定乳粉中蛋白质常用凯式定氮法，此法虽有仪器设备简单的优点，但它却存在着操作繁琐、费时、蒸馏过程易发生倒吸现象等不足;利用全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质虽可较好完成分析，但价格昂贵不易于推广。本文利用KDN-04B 型定氮仪经过多次实验表明，该仪器测定情况符合国标要求，且具有操作方便，稳定，耗时短，经济适用等优点，测定结果较为满意。

　　1 实验原理

　　根据凯氏定氮法原理，食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸溶液吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。KDN-04B型定氮仪是根据凯氏原理而设计的，主要有样品的消化和蒸馏二个操作步骤组成，前半个过程由KDN-04B型消化炉来进行，后半个工作过程由蒸馏器来完成，最终根据标准酸液消耗量计算出被测样品的蛋白质含量。

　　2 仪器与试剂

　　仪器 KDN-04B 型定氮仪、KDN-04B 型消化炉(带消化管)、酸式滴定管 25mL、三角烧瓶250mL、量桶 50 mL。

　　试剂硫酸钾、硫酸铜、硫酸、硼酸溶液(20g/L)、氢氧化钠溶液(400 g/L)、0.1mol/L 盐酸标准溶液、混合指示剂(把 1g/L 溴甲酚绿乙醇溶液 5 份和1g/L甲基红乙醇溶液1份混合而成)。

　　3 操作步骤

　　样品消化：精密称取乳粉0.4g左右(约相当于蛋白质 70-80mg)于干燥的消化管中，加入0.1gCuS04、3gK2SO4、10mL 浓 H2SO4摇匀。开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷至室温。碱化蒸馏：量取硼酸溶液(20g/L)50mL于三角瓶中，加入混合指示剂2-3 滴。开定氮仪，蒸汽发生器内注满水，用氢氧化钠溶液(400g/L)冲洗管路。放好接收瓶，将消煮管旋于定氮仪上，加氢氧化钠溶液(400g/L)50ml，加热蒸馏，待接收液达到150mL时，停止蒸馏。

　　样品滴定：以 0.1mol/L 盐酸标准溶液滴定至灰色为终点。根据酸的消耗量计算蛋白质的含量。同时按上述方法做试剂空白。

　　4 实验结果

　　含量测定重复性及精密度试验 取蛋白质含量不同的 3 种样品。每一种样品平行测6次，测定结果见表 1，结果的相对平均偏差(RSD)均小于 2.0%，表明此法重复性较好，精密度较高。

　　加样回收率实验 精密称取已知含量样品(样品 3 含蛋白质18.9%即含氮 2.96%), 精密加入硫酸铵适量，按含量测定方法测定，以氮含量计算回收率。结果如下。方法显著性比较 用国标法中定氮装置再分别测定实验 1 中三个样品的蛋白质含量结果见表3，结果表明，测定结果无显著性差异(P=O.95时，对应的t值<4.30，符合要求)。